当细胞长到融合成单层状态时,在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域,称为“划痕”。划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕”愈合。在细胞迁移过程中在开始和定期捕获图像,通过比较图像以确定细胞迁移速率。 二、操作步骤 a. 用marke笔在6孔板背后均匀的划横线; b. 取出细胞弃掉培养基,用PBS 清洗 2-...
Western Blot磷酸化蛋白攻略一、简介 细胞利用蛋白质的选择性磷酸化作用来调整细胞内诸多的生理加工过程。在靶蛋白的特定氨基酸序列模体上,蛋白激酶可将磷酸基偶联在酪氨酸、丝氨酸或苏氨酸的残基上。该过程又可通过蛋白质磷酸酯酶逆转。蛋白激酶和蛋白磷酸酶可识别特定的模体和特定的蛋白质从而决定了其功能的特异性。大约10%或更多的蛋白质的磷酸化受到位点特异性调控细胞的调控可以开启或调...
Western Blot大分子蛋白攻略一、样品制备 大分子量蛋白不好提取,因为很多大分子量蛋白是膜蛋白,膜蛋白属于非可溶性蛋白,且表达量通常较低,一般使用溶液法(RIPA等)裂解时,通常会丢失在不可溶组分中,所以要选择合适的方法来进行蛋白的提取或富集。提取总蛋白时建议适当延长裂解时间,有助于大分子量蛋白的充分裂解。二、SDS-PAGE电泳分离胶的使用及浓度 凝胶主要有...
一、简介蛋白质印迹法(免疫印迹试验)即Western Blot,简称WB。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色,通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。Western Blot 印迹常用的转移膜主要是硝酸纤维素膜(NitrocelluloseBlotting M...