病理切片技巧

病理切片技巧

       一、组织固定

       固定是指将各种组织浸入防腐剂内，使细胞内的物质为不溶性。固定组织的目的是设法得到接近正常生命状态的细胞结构。有人说“形态学的美是良好固定产物”，这说明固定

的特殊重要作用。

      二、固定目的

       1.抑制自溶和腐败：新鲜组织如果不经固定，任意放置细胞内酶对蛋白质的分解，以及细胞孳生，则易因细菌繁殖而致组织腐烂。细胞内的蛋白质分解酶将蛋白质分解为氨基酸

后脱离细胞而引起组织的自溶。

       2.保存：细胞经过固定，不但可以防止自溶和细菌性腐败，而且能沉淀或凝固组织内的各种成份和病理代谢产物，如蛋白质、脂及脂蛋白、脂肪、糖类、色素，其它碳水化合物、

无机盐成份、微生物等都可以经过固定而保存下来，并在制片过程中不为其他试剂溶解破坏。

       3.硬化：固定剂的硬化作用能使柔软组织（如脑）的质地变硬而易于操作。

       4.胶质物体的固化：固定能使细胞正常的半液体状（溶胶）变为不能逆转的固体状（凝胶）粘度。

        5.肉眼鉴别：固定可将各种细胞和组织成分的折光率作不同程度的改变，增强组织的折光指数，固定时更容易辨认。

      6.对染色的影响：某些固定剂尚具有一定的媒染作用而增进染色（如苦味酸对于染色的媒染作用）可使细胞各种部位易于着色，所以组织固定后有利于制片染色和在显微镜下的

观察。

       7.渗透和固定：固定还可以使组织和细胞的各种渗透压不再发生改变，在制片时就能在最大范围内保持组织和细胞的原来形态。

       三、固定的方法及注意事项

       1.合适容器：一般容器的容积是组织的10-15倍以上。

      2.充足时间：组织越大越厚，固定时间应越长，反之。一般4-12小时或更长。

       3.足量的固定液：应该使用足量的固定液，一般应为组织体积5-10倍，最少不应于五倍。不要先将标本块放入容器后再注入固定液，以免标本贴付于器皿。

      四、石蜡切片常规操作

        切片前准备：摊片机温度设置在 45-50℃，切 片容易展开，蜡不会快速溶解 散开为宜；烤片机温度设置在 70℃左右，固定切片机刀座、安 装刀片，注意检查切片角度、 切片

厚度。

       蜡块冷冻：蜡块冷冻温度不宜过低，并不是冷冻越低越好。

      修片与切片：粗修组织注意组织的切面与层次，保证组织完整性；粗修注意修片厚度与修片速度，避免粗修造成组织撕裂与崩缺； 切片前注意细修切片，去除粗修时造成的组

织裂隙；切片厚度一般为 4μm，淋巴结 2-3μm， 肾穿与骨髓穿刺组织 1-2μm， 脑组织 4-5μm；切片时注意速度适中，过慢与过快易造成切片厚薄不均或切片厚度不准；切片要

求完整、均匀、厚度适宜。

       展片与捞片：烤片前注意沥干切片上的水分；烤片温度不宜过高，温度高于蜡熔点的 5-10℃，时间以烤干水分为宜。

       切片结束：卸下刀片，清洁切片机、设备 切片结束仪器与操作台面；整理蜡块、 切片染色。

       五、切片常见问题分析

       1、切片太厚

       2、切片空洞

       3、切片刀痕

       4、切片太颤抖

      5、切片褶皱

       6、跳片

       六、注意事项

       1、批量修片，认真仔细粗修、细修，防止组织从包埋盒上脱落。

       2、不要使用硬的物体接触刀片，如镊子，刷子。

       3、切片刀刃倾斜过大或过小都不能正常进行切片。

       4、有系统的使用刀片，从一边顺序使用到另外一边。

       5、精准的刀架侧向移动功能,确保刀片全长使用。

       6、确保蜡块的温度是冷的，或者使用冷台, 防止过度冷冻组织块。

       7、高质量的刀片，并且注意定期更换刀片，操作人员良好的使用习惯能确保刀片最长使用寿命。