♦ 服务介绍
晚期凋亡细胞中染色体DNA双链或单链断裂产生粘性3'-OH末端,在脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT)的催化下,将带有生物素(Biotin)分子的dUTP,标记到DNA的3'-末端,随后和辣根过氧化物酶(HRP)标记的链酶亲和素Streptavidin (Streptavidin-HRP)结合,最后通过DAB显色来显示凋亡细胞,从而可以通过普通光学显微镜检测到凋亡的细胞,这就是TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法检测细胞凋亡的原理。
♦ 实验流程(白光)
脱蜡至水--蛋白酶K修复--破膜通透--孵育tunel反应液--孵育POD反应液-- DAB显色--苏木素染核--脱水封片--镜检拍照
♦ 实验流程(荧光)
脱蜡至水--蛋白酶K修复--破膜通透--孵育tunel反应液--DAPI染核--抗荧光素淬灭剂封片-- 镜检拍照
♦ 样本要求
1.悬浮生长培养细胞的爬片或涂片,贴壁生长的培养细胞,冰冻切片,常规石蜡切片和新鲜组织均可;
2.动物材料取用时需对动物施以麻醉,常用的麻醉剂有氯仿和乙醚,或将动物杀死后迅速取出所需要的组织;
3.取材必须新鲜,应尽可能割取生活着的组织块,并随即投入固定液,固定液与组织块的体积比应在10:1;
4.切取材料时刀要锐利,避免因挤压细胞使其受到损伤;
5.切取的材料应小而薄,便于固定液迅速渗入内部,一般厚度不超过3mm,大小不超过5×5mm2;
6.对于有血迹的样本,可用PBS液或生理盐水冲洗后直接放入固定液中,需32小时内送样,48小时内处理。
♦ 送样运输要求
石蜡切片常温、冰冻切片-20℃、固定后细胞爬片4℃